总大肠菌群滤膜法membrane filter technique for total coliforms ，总大肠菌群用微生物限度薄膜过滤检测仪如何检测

　　总大肠菌群滤膜法是指用孔径为0.45pm的微孔滤膜过滤水样,将滤膜贴在添加乳糖的选撣性培养基上37C培养24h,能形成特征性菌落的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌以检测水中总大肠菌群的方法。

　　检验步骤

　　1、准备工作

　　滤膜灭菌:将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置于佛水浴中煮佛灭菌3次,每次15 min。前两次煮沸后需更换水洗涤2次~3次,以除去残留溶剂。滤器灭菌;用点燃的酒精棉球火焰灭菌。也可用蒸汽灭菌器103. 43 kPa (121C,15 Ib)高压灭菌20 min.

　　2、过滤水样

　　用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上.固定好滤器,将100 ml水样(如水样含菌数较多，可践少过滤水样量，或将水样稀释)注人滤器中,打开滤器阀门,在-5.07X10' Pa(负0.5大气压)下抽滤。

　　3、培养

　　水样滤完后,再抽气约5s.关上滤器阀门,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分.移放在品晶红亚硫酸钠培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡,然后将平皿倒置.放入37C恒温箱内培养24 h士2 h.

　　4、结果观察与报告

　　挑取符合 下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检：

　　紫红色,具有金属光泽的菌落:

　　深红色.不带或略带金属光泽的菌落;

　　淡红色.中心色较深的菌落。

　　凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌.再接种乳糖蛋白胨培养液,于37仁培养24h,有产酸产气者,则判定为总大肠菌群阳性。

　　按式(1)计算滤膜 上生长的总大肠菌群数,以每100 mI.水样中的总大肠菌群数(CFU/100 mL)报告之。